Post by jone447 on Aug 2, 2023 1:54:41 GMT -5
5% (v/v) NP40、50 μM DTT、cOmplete TM）中裂解不含 EDTA 的蛋白酶抑制剂混合物（Roche））并在冰上孵育 10 分钟。通过以 13,000 g 离心 10 分钟清除裂解物和细胞培养基。收集上清液并用于免疫沉淀。使用与 Protein G Dynabeads 缀合的靶标特异性抗体在 4 °C 下过夜免疫沉淀 TIAL1 靶标和非靶标。每ml细胞裂解物或细胞培养基使用10微升G蛋白磁性颗粒。将磁珠收集在磁架上，用 1 × NP40
裂解缓冲液洗涤 3 次，然后使用闪烁计数器进行亚洲手机号码列表定量。 RNA 分离、定量和测序 根据制造商的说明，使用 Trizol (Life Technologies) 提取 RNA，但在 -20 °C 下进行 30 分钟异丙醇沉淀。所有测序样品的 RNA 完整性均在 Agilent 2100 生物分析仪上进行分析。必要时，用无 DNA 试剂盒 (Invitroge翻译的影响（图 4j ）。此外，当通过腺病毒介导的Tial1过表
达来挽救Tial1 LKO细胞中的Tial1表达时，发现对翻译效率产生相反的影响（图 4k）。总而言之，这些结果证明了 TIAL1 和 Insig2 mRNA 之间的直接相互作用，并表明 TIAL1 通过与 Insig2 3'UTR 结合并增强 Insig2 翻译来负向调节 INSIG2 转录后表达。 调节肝脏 TIAL1 水平可调节甘油三酯和胆固醇分泌 为了评估肝Tial1消融小更全面地了解脂蛋白谱，我们汇集了突变型和野生